微生物污染會(huì)對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的正常生存、生長及功能活動(dòng)造成極大干擾，嚴(yán)重的可致細(xì)胞死亡。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性也大打折扣。所以，保持細(xì)胞生存環(huán)境無微生物污染是體外實(shí)驗(yàn)的前提條件。良好的無菌操作可大大降低細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)。那么你知道什么是支原體污染嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　支原體是介于細(xì)菌和病毒之間能獨(dú)立生活的最小微生物，無細(xì)胞壁，形態(tài)多變，大小介于0.2 ~ 2 μm之間，多吸附在細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。不同支原體的生物學(xué)性狀有很大差別，一般對(duì)熱敏感，對(duì)青霉素普遍有抗藥性。由于支原體無致死細(xì)胞毒性且可與細(xì)胞長期共存，故培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，無明顯變化，或有微細(xì)變化卻由于傳代和換液而被緩解。除了細(xì)胞培養(yǎng)狀況不佳，采用常規(guī)顯微鏡并不容易觀察支原體污染，其檢出需借助熒光染色、PCR、ELISA、免疫染色、放射自顯影術(shù)、微生物學(xué)分析等方法，其中采用核酸熒光染料進(jìn)行DNA染色是相對(duì)簡單和可信的方法之一。
 

　　當(dāng)進(jìn)行熒光染色時(shí)，在40×或100×物鏡下支原體可被顯示為細(xì)胞質(zhì)上明確的微?；蚪z狀染色，一般大小、性質(zhì)一致，此時(shí)同樣被亮染的培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核可作為陽性對(duì)照。確定是否存在支原體污染需盡可能多地觀察染色樣本，因?yàn)椴皇撬信囵B(yǎng)的細(xì)胞都會(huì)被污染。
 

　　用熒光染色法進(jìn)行支原體檢測時(shí)，培養(yǎng)物的細(xì)胞碎片可能會(huì)造成假陽性結(jié)果，但細(xì)胞碎片不會(huì)出現(xiàn)清晰的點(diǎn)狀或絲狀支原體形態(tài)。若仍不能確認(rèn)，可吸取適量待檢培養(yǎng)基與指示細(xì)胞(為已明確無支原體污染且是支原體的適宜宿主，同時(shí)生長良好，有足夠的細(xì)胞質(zhì)以顯示粘附的支原體，如MDCK細(xì)胞)共培養(yǎng)，然后熒光染色來觀察指示細(xì)胞表面是否有支原體，從而避免誤判。
 

　　運(yùn)用熒光染色法有時(shí)會(huì)觀察到細(xì)胞質(zhì)存在均勻亮染，這可能是由RNA引起的，這類熒光會(huì)逐漸變暗，可將染色樣本干燥避光保存后在第2天觀察。如果對(duì)熒光檢測的結(jié)果存在懷疑，可重復(fù)檢測或采用其他方法再次檢測。
 

　　支原體可黏附在宿主細(xì)胞表面，從細(xì)胞膜獲取脂質(zhì)和膽固醇，造成細(xì)胞膜損傷。支原體能抑制細(xì)胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細(xì)胞抗原性，導(dǎo)致染色體畸變，干擾病毒復(fù)制以及具有類似病毒的作用。不同細(xì)胞對(duì)支原體的感受性和反應(yīng)存在差異。
 

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