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更新時間：2025-12-02
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一、內(nèi)參抗體簡介
內(nèi)參抗體，就是用來檢測內(nèi)參蛋白的抗體 。它的唯1使命，是作為一個“標尺"或“參照物"，來校正你實驗中的各種誤差。
在Western Blot等實驗中，你的最終目的是比較不同樣本中目標蛋白的表達量差異。但很多操作環(huán)節(jié)都會引入變量，導(dǎo)致比較失真，例如：
細胞裂解程度不同 ? 上樣蛋白總量不同。
上樣操作誤差 ? 每個孔實際加載的蛋白量不同。
轉(zhuǎn)膜效率不均 ? 轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白量不同。
顯色時間波動 ? 信號強度不穩(wěn)定。
如何解決？ 引入一個在樣本中恒定表達的蛋白質(zhì)作為參照，這就是內(nèi)參蛋白。而檢測它的抗體，就是內(nèi)參抗體。
二、內(nèi)參抗體工作原理
1. 前提假設(shè)：內(nèi)參蛋白（如GAPDH、β-Actin）在所有樣本、所有處理組中的表達量是基本恒定的。
2. 同步檢測：在檢測你的目標蛋白（一抗孵育）之后或同時，用內(nèi)參抗體去檢測同一張膜上的內(nèi)參蛋白。
3. 數(shù)據(jù)校正：
如果A樣本的目標蛋白信號很強，但它的內(nèi)參信號也很強，說明可能是A樣本上樣量偏多。
如果B樣本的目標蛋白信號弱，但它的內(nèi)參信號也弱，說明可能是B樣本上樣量偏少。
最終，你需要用【目標蛋白的信號強度】除以【內(nèi)參蛋白的信號強度】，得到一個相對表達量。用這個校正后的值在不同樣本間進行比較，才是準確可靠的。
三、常用內(nèi)參抗體選擇（取決于樣本和研究系統(tǒng)）
內(nèi)參蛋白 | 常用抗體克隆/類型 | 主要適用范圍 | 注意事項 |
GAPDH | 小鼠單抗（如6C5） | zui常用，適用于大多數(shù)細胞和組織樣本。 | 在某些代謝研究中或特殊處理下，其表達可能發(fā)生變化。 |
β-Actin | 小鼠單抗（如8H10D10） | 細胞質(zhì)蛋白，適用于細胞和組織，非常常用。 | 在肌肉細胞或某些癌細胞中表達可能不穩(wěn)定，分子量（~42 kDa）與常見蛋白接近，需注意區(qū)分。 |
β-Tubulin | 小鼠單抗（如9F3） | 細胞骨架蛋白，作為細胞質(zhì)內(nèi)參。 | 與β-Actin類似。 |
Histone H3 | 兔多抗或單抗 | 細胞核蛋白內(nèi)參。專門用于核蛋白提取物或研究核內(nèi)事件。 | 不適用于全細胞裂解液。 |
Lamin B1 | 兔多抗或單抗 | 核膜蛋白內(nèi)參，比H3更穩(wěn)定，是優(yōu)質(zhì)的核內(nèi)參。 | 不適用于全細胞裂解液。 |
Vinculin | 小鼠單抗（如7F9） | 細胞骨架蛋白，分子量較大（~124 kDa），可作為高分子量內(nèi)參。 | 在某些細胞粘附和遷移研究中可能變化。 |
COX IV | 兔多抗或單抗 | 線粒體內(nèi)參。用于線粒體蛋白提取物。 | 僅用于細胞器級別研究。 |
四、關(guān)鍵注意事項
根據(jù)樣本和研究目的選擇：這是最重要的原則。研究核蛋白就用核內(nèi)參，研究全細胞蛋白就用GAPDH或β-Actin。
分子量錯開：內(nèi)參蛋白的分子量應(yīng)與你的目標蛋白有明顯差異，方便在同一張膜上同時或先后檢測。
驗證表達穩(wěn)定性：在進行正式實驗前，先用內(nèi)參抗體檢測一下你的實驗樣本（特別是經(jīng)過藥物處理、基因敲除等操作后），確認所選內(nèi)參的表達確實穩(wěn)定不變。
同源物種反應(yīng)性：確保你購買的內(nèi)參抗體能識別你實驗樣本的物種（如人、小鼠、大鼠）。
一句話總結(jié)、
內(nèi)參抗體是實驗的“糾錯官"，通過檢測恒定表達的內(nèi)參蛋白，來校正上樣量和其他技術(shù)誤差，確保你觀察到的目標蛋白差異是真實的生物學(xué)變化，而非操作失誤。 沒有它，Western Blot的定量比較就失去了根基。
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