CHO細(xì)胞（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞）是生物制藥和基礎(chǔ)研究中zui常用的哺乳動(dòng)物表達(dá)宿主之一，用于生產(chǎn)重組蛋白（如治療性抗體、酶、激素等）。轉(zhuǎn)染是將外源核酸（通常是質(zhì)粒DNA）導(dǎo)入CHO細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵步驟。

以下是CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常見(jiàn)方法、步驟和注意事項(xiàng)：

一、 CHO細(xì)胞主要轉(zhuǎn)染方法

?化學(xué)轉(zhuǎn)染：使用轉(zhuǎn)染試劑（如聚合物試劑、脂質(zhì)體等）幫助DNA或RNA進(jìn)入細(xì)胞。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)。

?電轉(zhuǎn)：通過(guò)電場(chǎng)使細(xì)胞膜暫時(shí)開(kāi)放，以便DNA/RNA進(jìn)入細(xì)胞。這種方法適用于準(zhǔn)備DNA轉(zhuǎn)染或大量細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)。

?病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染：使用病毒載體（如腺病毒或慢病毒）將目標(biāo)基因?qū)爰?xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高，但制作過(guò)程復(fù)雜。

二、CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

以使用中科百抗PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit為例。

適用于各種CHO細(xì)胞系，包括CHO-S、CHO-K1等。shouxuan ExpiCHO-S。PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit配合PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer使用可大幅度提高重組蛋白的表達(dá)產(chǎn)量。

??材料準(zhǔn)備：
試劑：PolyToolTM CHO Transfection Reagent、Transfection Reagent Diluent、PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer；
宿主細(xì)胞（例：ExpiCHO-S，瞬轉(zhuǎn)前1~2天接種，瞬轉(zhuǎn)當(dāng)天密度~6×106cells/mL，倍增時(shí)間~18 h；

表達(dá)質(zhì)粒（例：CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Trastuzumab表達(dá)質(zhì)粒，濃度1 μg/μL；

培養(yǎng)容器（例：125 mL搖瓶）。
??轉(zhuǎn)染（以25mL瞬轉(zhuǎn)體系為例，標(biāo)準(zhǔn)方案）
1.換液：300g離心5 min，收集ExpiCHO-S細(xì)胞，換液至37°C預(yù)熱好的PolyToolTM CHO Medium中，同時(shí)調(diào)整細(xì)胞密度到6×106cells/mL。細(xì)胞搖床設(shè)定為37°C，8.0% CO2，120 rpm，80% RH（相對(duì)濕度）。
2.復(fù)合：

①取1.25 mL PolyToolTM CHO Medium（占最終表達(dá)體積的5%）稀釋25μg質(zhì)粒DNA（單質(zhì)粒系統(tǒng)質(zhì)量為25μg，雙質(zhì)粒系統(tǒng)總質(zhì)量為25μg），輕柔混勻；

②另取1.25mL PolyToolTM CHO Medium，加入375μL室溫融解的Transfection Reagent Diluent和62.5μL PolyToolTM CHO Transfection Reagent（確?？?/span>DNA與轉(zhuǎn)染試劑的質(zhì)量比為1:2.5），輕柔混勻；

③將轉(zhuǎn)染試劑稀釋液緩慢加入質(zhì)粒稀釋液中，立即輕柔混勻，室溫孵育10 min使轉(zhuǎn)染復(fù)合物充分形成（復(fù)合的時(shí)候由于特異的組裝結(jié)構(gòu)可能會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，不影響使用效果，請(qǐng)放心使用）。
3.轉(zhuǎn)染：從搖床中取出第1步換液培養(yǎng)的ExpiCHO-S，加入孵育好的DNA/PolyToolTMCHO Transfection Reagent復(fù)合物，完成轉(zhuǎn)染。放回?fù)u床繼續(xù)培養(yǎng)。
4.轉(zhuǎn)染后18-22h(Day1)：補(bǔ)料2mL Enhance S1（占最終表達(dá)體積的8%）、75μL Enhance S2（占最終表達(dá)體積的0.3%）和250μL Expression enhancer（占最終表達(dá)體積的1%），取樣計(jì)數(shù)、測(cè)生化。
5.之后每隔三天（若表達(dá)7天則在Day4）：補(bǔ)料2mL Enhancer S1（占最終表達(dá)體積的8%），取樣計(jì)數(shù)、測(cè)生化。
6.轉(zhuǎn)染后Day7：取樣計(jì)數(shù)、測(cè)生化，收獲上清。

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