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夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么?

更新時間:2023-10-18點擊次數(shù):1763

ELISA的原理是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、夾心法原理

夾心法使用的是兩個抗體夾抗原或者兩個抗原夾抗體的方法,這種復合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu),利用一對配對wan全的抗體,可以特異性檢測抗原,當然主要針對的是具有至少2個以上抗原表位的抗原,抗體的配對可是門技術(shù)活,很多公司可以生產(chǎn)抗體,但是配對卻很少做,主要原因在于篩選的難度,可能開發(fā)的幾十株針對同一抗原的抗體,都很難有一對合適的可以配對,原因是多方面的,有抗原的表位、構(gòu)象等原因,也有抗體效價的原因,當然還有篩選成本的原因,所以每一個ELISA試劑盒都是經(jīng)過多次和長期的驗證得來的。

二、競爭法原理

競爭法的使用相對來說就窄一點了,其原理是利用抗原抗體結(jié)合的可逆性,但在合適濃度時又可達到結(jié)合和解離的穩(wěn)定期,那么親和力更強的抗體自然就能更有效的結(jié)合抗原了。一般結(jié)合的解離使用最多的就是SPR和BLI技術(shù)了,可以高精度或高通量的測抗原/抗體、受體/配體的親和力。

利用已知的抗原進行標記(抗原A),作為對照,實驗組加入樣本(抗原B)及標記抗原,與對照組相比,顯色低,則該抗原A與抗原B競爭結(jié)合抗體,這種方法一般用于抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原。

包被抗體進行競爭法呢,一般用于ADA,競爭、非競爭抗體鑒定/篩選,抗體的競爭篩選是有效的免疫原性檢測手段之一。

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