polyplus轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin®在1nM siRNA下已經(jīng)提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多種粘附細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)，其溫和的作用模式確保了更可靠的數(shù)據(jù)和優(yōu)異的細(xì)胞活力。由于與血清和抗生素的兼容性，INTERFERin®易于使用，也非常適合轉(zhuǎn)染miRNA和其他寡核苷酸，如pre-miRNA、mimic miRNA等。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

一、更少的siRNA，更少的脫靶效應(yīng)

一些出版物表明，轉(zhuǎn)染低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)。事實(shí)上，當(dāng)以高濃度轉(zhuǎn)染siRNA時(shí)，可以觀察到這些不想要的非特異

性副作用。因此，可以通過使用盡可能少的siRNA來提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。這就是為什么INTERFERin®被專門設(shè)計(jì)為使用

低siRNA濃度提供高沉默效率的原因。

INTERFERin®介導(dǎo)的1 nM特異性siRNA的遞送顯示出對(duì)基因表達(dá)的選擇性和高效敲低，而競爭對(duì)手（L2K）至少需要

10 nM siRNA才能達(dá)到50%的沉默效率（圖1）。

圖1:INTERFERin®只需要1 nM siRNA即可實(shí)現(xiàn)有效的基因沉默。根據(jù)制造商的建議，使用INTERFERin®或競爭對(duì)手L2K用抗-Luc siRNA轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲螢光素酶的3LL細(xì)胞。48小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達(dá)。對(duì)照siRNA未觀察到抑制作用。

令人驚訝的是，在10pM的siRNA下仍然實(shí)現(xiàn)了50%的沉默（圖2）。

圖2：即使在極低的siRNA濃度下，INTERFERin®也是高效的。A549-GL3Luc細(xì)胞在血清存在下使用INTERFERin®轉(zhuǎn)染，并降低抗-Luc siRNA的濃度。48小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達(dá)。對(duì)照siRNA未觀察到抑制作用。

用INTERFERin®轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的1nM siRNA可將層粘連蛋白基因表達(dá)顯著降低至幾乎無法檢測的水平（圖3）。

圖3：用INTERFERin®轉(zhuǎn)染1nM siRNA導(dǎo)致有效和特異的基因沉默。使用INTERFERin®用1nM層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染CaSki細(xì)胞。48小時(shí)后，通過免疫熒光顯微鏡測定層粘連蛋白A/C沉默效率。

二、適用于miRNA轉(zhuǎn)染microRNA（miRNA）寡核苷酸的轉(zhuǎn)染越來越多地被用于分析特定miRNA對(duì)細(xì)胞功能的生物學(xué)影響。INTERFERin®是遞送

miRNA、miRNA模擬物或前miRNA的首xuan試劑。

INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑，特別設(shè)計(jì)用于在多種細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率，從而實(shí)現(xiàn)高基因沉默或刺激

基因表達(dá)。事實(shí)上，一些miRNA也已知通過與感興趣基因的啟動(dòng)子結(jié)合來誘導(dǎo)基因表達(dá)。例如，INTERFERin®介導(dǎo)的miR-373

的遞送導(dǎo)致E-鈣粘蛋白表達(dá)增加3倍（圖4）。

圖4：用INTERFERin®轉(zhuǎn)染miR-373增強(qiáng)E-鈣粘蛋白的表達(dá)。將PC-3細(xì)胞接種在6孔板中，并用miR-373（25 nM）轉(zhuǎn)染，每孔使用8µl的INTERFERin®。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，通過RT-qPCR測定E-鈣粘蛋白mRNA的表達(dá)水平。用HPRT-1基因表達(dá)對(duì)測定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

INTERFERin®的陽離子組分只需要很少的寡核苷酸量，從而實(shí)現(xiàn)溫和的轉(zhuǎn)染過程。此外，簡單而穩(wěn)健的協(xié)議確保了可重復(fù)的結(jié)果。像miRNA這樣的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin®轉(zhuǎn)染，從而導(dǎo)致強(qiáng)烈的基因沉默或刺激基因表達(dá)。無論使用何種濃度的INTERFERin®，效果都大致相同，使INTERFERin®成為一種經(jīng)濟(jì)的試劑。例如，使用不同體積的INTERFERin®的折疊變化始終在1.5和1.8之間（圖5）。

圖5:INTERFERin®在非常低的量下已經(jīng)很有效。將PC-3細(xì)胞接種在6孔板中，并使用4、6或8µl/孔的INTERFERin®用miR-373（10nM）轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，通過Western印跡分析E-鈣粘蛋白的表達(dá)。使用β-肌動(dòng)蛋白表達(dá)對(duì)測定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。以對(duì)照情況為參考來表示量化。

與高細(xì)胞活力相關(guān)的高轉(zhuǎn)染效率使INTERFERin®成為為科學(xué)出版物生成相關(guān)數(shù)據(jù)的首xuan試劑。事實(shí)上，自推出以來，使用INTERFERin®研究miRNA和miRNA相關(guān)分子的出版物數(shù)量呈指數(shù)級(jí)增長（圖6）。

圖6:INTERFERin®參與了越來越多關(guān)于miRNA轉(zhuǎn)染的出版物。

三、超過90%的基因沉默

對(duì)于許多貼壁細(xì)胞系或原代細(xì)胞，1nM的siRNA足以獲得90%以上的基因沉默。對(duì)于懸浮細(xì)胞系，使用5nM siRNA的INTERFERin®仍然可以達(dá)到80%的沉默（表1）。

表1：用INTERFERin®成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系和獲得的沉默效率。

四、卓yue的細(xì)胞活力

在細(xì)胞活力方面，INTERFERin®優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑。用1nM siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，用INTERFERin®轉(zhuǎn)染的細(xì)胞看起來是健康的，而用試劑可以清楚地觀察到毒性（圖7）。

圖7:INTERFERin®對(duì)細(xì)胞極為溫和，如使用INTERFERin®或競爭試劑轉(zhuǎn)染siRNA 48小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)的比較所示。A549-GL3Luc細(xì)胞在血清存在下，使用INTERFERin®或競爭對(duì)手S或H，根據(jù)制造商的方案，用1nM螢光素酶siRNA轉(zhuǎn)染。

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